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    超凈工作臺在康乃馨的離體快繁的應用
    發布時間:2011-12-26 08:53:50   瀏覽:5599

    超凈工作臺在康乃馨的離體快繁的應用

    一、 儀器設備和試劑

    超凈工作臺、帶有吸水紙的成套的培養皿,無菌水

    培養基 N6+1 mg/L 6-BA

    剪刀、槍型鑷子

    量筒、酒精燈、濾紙、蒸餾水、小刷子

    95%乙醇、70%酒精、70%酒精棉球、0.2%升汞、甲醛、高錳酸鉀、來蘇爾

    紗布、棉塞、牛皮紙、才培純、肥皂、酒精噴壺

    植物的嫩莖、側芽、莖尖、葉片、花、愈傷組織上的不定芽、胚狀體、試管苗等

    二、實驗材料 康乃馨枝條

    三、方法和步驟

    1 外植體滅菌 取從市場上購買的康乃馨枝條,去掉大的葉片,剪取帶腋芽的節結,用肥皂(洗潔精)清洗表面,再用自來水沖洗 30-60分鐘,然后在無菌室(超凈工作臺)內用70%酒精浸沒20-40秒鐘(根據材料的木質化程度掌握具體的浸沒時間。用0.2% 的升汞溶液浸泡10-15分鐘,再用無菌水沖洗3-4次,放入已滅菌的培養皿中的濾紙上待用。

    2 接種 先進行無菌室內消毒,用紫外燈照射30-45分鐘,地面用低濃度的來蘇爾溶液消毒,紫外燈關閉約20分鐘后方可進去工作。

    超凈工作臺消毒 開啟無菌風開關,讓無菌風吹上30-45分鐘后方可工作。并用70%的酒精棉球擦凈工作臺。

    接種時先點燃酒精燈,鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好冷卻后的鑷子、剪刀取出一個側芽或小段莖,迅速打開三角瓶口,將材料才插入瓶內,注意材料上下端的極性,不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙,用記號筆在瓶體上寫明日期和材料。

    3 培養條件: 25℃光照13小時/天 光強1000 Lux

    4 繼代培養(見下一個實驗)

    5 誘導生根:用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無激素的N6培養基誘導生根

    6 試管苗移栽〈參見有關其它實驗〉

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